Nel cuore del centro storico di Polignano la Chiesa Matrice dedicata all'Assunta è stata costruita nel 1295. L'edificio religioso in stile rinascimentale con elementi barocchi conserva al suo interno un pulpito ligneo intarsiato risalente al XVI secolo, un bel fonte battesimale del 1776 ed uno straordinario coro in legno con dipinti di grande valore, tra cui spicca uno splendido polittico di Bartolomeo Vivarini, restaurato e oggi conservato nella sacrestia. Sempre nella sacrestia, si conservano tele dei secoli XVII e XVIII, la Legenda del Martirio di San Vito e le statue lignee dell'Immacolata, di San Benedetto e San Bernardo, antichi paramenti ed una lettera di Sant'Alfonso Maria dé Liguori, provenienti dal Monastero di San Benedetto.
L'impianto barocco della chiesa è frutto della ricostruzione del 1580.
Il campanile è quadrangolare ed alla sua base corrisponde la cappella edificata dalla famiglia dei Buonospirito nel 1503, con il famoso presepe di Stefano da Putignano. Di notevole pregio sono anche la Pietà e la Madonna col Bambino, collocate rispettivamente a sinistra e a destra dell'altare maggiore.